Tests ELISA
Au laboratoire, les virus recherchés par la technique ELISA sont ceux de :
- L’enroulement (GLRaV-1*, GLRaV-2*, GLRaV-3*, GLRaV 1+3*, GLRaV-4 à -9 sauf GLRaV-8)
- Le court-noué (ArMV* et/ou GFlV*)
- La marbrure (GFkV)
Seuls les virus suivis d’un astérisque (*) font partie de la portée d’accréditation.
L’analyse ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) est une méthode immuno-enzymatique de détection des pathogènes. Elle est basée sur la reconnaissance par des anticorps spécifiques des protéines de l’enveloppe des virus. Une seconde série d’anticorps liés à une enzyme permet de visualiser la présence du virus par une coloration jaune de l’échantillon lors de l’ajout du substrat de l’enzyme.
Principe de la technique ELISA (PDF)
Ces analyses sont proposées à tout viticulteur attentif à l’état sanitaire de ses vignes et aux pépiniéristes dans le cadre de l’autocontrôle des champs de pieds-mères.
Ainsi, tout le matériel servant à la production des plants des pépinières MERCIER est testé par le laboratoire dans le cadre de l’autocontrôle.
Le laboratoire est accrédité selon l’ISO 17025 par le COFRAC (n° 1-1919, portée disponible sur www.cofrac.fr) pour les analyses ELISA depuis octobre 2007.
Conditions générales des analyses ELISA (PDF)
Modalités techniques (PDF)
Demande d’analyse ELISA (PDF)
(à joindre à tout envoi d’échantillons)
Tarifs ELISA (PDF)
Tests PCR
Les tests PCR sont réalisés pour détecter des phytoplasmes tel que le bois noir ainsi que l’Agrobacterium vitis responsable du Broussin ou Crown gall. Ces tests peuvent être effectués sur des plants avec ou sans symptômes.
La PCR (Polymerase Chain Reaction) est une méthode de biologie moléculaire d’amplification d’ADN in vitro. La détection se fait par amplification exponentielle de fragments spécifiques de génome du pathogène (ADN ou ARN pour les virus) présents en petite quantité dans la plante. Cette amplification se fait grâce à l’enzyme Taq Polymerase et à des amorces complémentaires du génome cible. La révélation se fait sous rayons UV après migration sur gel par électrophorèse.
Principe de la technique PCR (PDF)
Modalités techniques (PDF)
(à joindre à tout envoi d’échantillons)
Contrôle de mycorhization
Un échantillonnage du lot à évaluer est fait. Des racines sont prélevées sur chaque plant de l’échantillon.
Elles subissent un processus de coloration par contraste des champignons avec du bleu Trypan.
Des fragments de racines secondaires sont montés entre lame et lamelle,
observés et notés en fonction du pourcentage de zones colonisées,
de la présence et de la quantité d’arbuscules et de vésicules.
On estime ainsi la mycorhization en quantité (+ ou –) et qualité (hyphes, arbuscules, vésicules).
Modalités techniques (PDF)
Crédits photo : INRA Dijon et K.Labonova
Contrôle de présence de Trichoderma
Des fragments (rondelles) flambés de plantes sont incubés en conditions stériles sur milieu de culture pour champignons et observés à la loupe.
La présence ou l’absence du microorganisme caractérisé par ses conidies vertes est notée.
La souche de Trichoderma utilisée dans les plants en production peut être ensuite confirmée par test PCR.
Modalités techniques (PDF)
